ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 Duplex Welded Tube for Chemical Industry ڪيميائي جزا، SPECC1L جي گھٽتائي جي ڪري ورهايل جوڑوں جي استحڪام کي وڌايو وڃي ٿو ۽ ڪرينيل نيورل ڪرسٽ سيلز جي شيڊنگ کي گھٽائي ٿو.

Nature.com گهمڻ لاءِ توهان جي مهرباني.توھان استعمال ڪري رھيا آھيو برائوزر ورزن محدود CSS سپورٽ سان.بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو).اضافي طور تي، جاري مدد کي يقيني بڻائڻ لاء، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ ڏيکاريون ٿا.

ASTM A790 2507 / 2205 1.4462 / 1.4410 Duplex Welded ٽيوب ڪيميائي صنعت لاء

Liaocheng Sihe SS مواد ڪمپنيء، لميٽيڊهڪ معروف ڪارخانو آهي جيڪو اسٽينلیس سٹیل جي سيمينٽ پائپس، روشن اينيل ٿيل ٽيوب، سيمينٽ ڪوئلڊ ٽيوبنگ وغيره ۾ ماهر آهي.گراهڪن کي سهولت ڏيڻ لاءِ، اسان وٽ ويلڊ ٿيل پائپ ۽ ٽيوب پڻ آهن.Liaocheng Sihe SS مواد ڪمپنيء، لميٽيڊسڀ کان وڌيڪ ترقي يافته پيداوار ۽ جاچ سامان آهي.اسان مڪمل طور تي توهان جي گهرج کي پورو ڪري سگهون ٿا.معيار جي مطابق تمام سختي سان، ٽيوب جيڪي اسان جي طرفان ٺاهيا ويا آهن انهن ۾ هميشه صحيح OD ۽ WT رواداري آهي.رواداري ڪنٽرول سختي سان معيار پيدا ڪرڻ جي مطابق آهي.اسان جي پروڊڪٽس هميشه گراهڪن سان مطمئن آهن.گراهڪ اسان جي پروڊڪٽس خريد ڪري وڌيڪ منافعو پيدا ڪيو.
a) OD (ٻاهر قطر): 3.18mm کان 101.6mm
ب) WT (ديوار ٿولهه): 0.5mm کان 20mm
ج) ڊگھائي: گراهڪ جي گهرج موجب
d) معيار: ASTM A312؛ASTM A269؛ASTM A789؛ASTM A790 وغيره
e) پروسيس جو طريقو: ERW، EFW وغيره

سلائڊر ڏيکاريندڙ ٽي مضمون في سلائڊ.سلائڊ ذريعي منتقل ڪرڻ لاء پوئتي ۽ ايندڙ بٽڻ استعمال ڪريو، يا هر سلائڊ ذريعي منتقل ڪرڻ لاء آخر ۾ سلائڊ ڪنٽرولر بٽڻ استعمال ڪريو.
ڪرنيئل نيورل ڪرسٽ سيلز (CNCC) جنين جي اعصابي فولڊ کي ختم ڪري ڇڏيندا آهن ۽ فارينجيل آرچز ڏانهن لڏپلاڻ ڪندا آهن، جيڪي گهڻو ڪري مڊلفيس جي جوڙجڪ ٺاهيندا آهن.CNCC dysfunction orofacial cleft جي etiology ۾ اهم ڪردار ادا ڪري ٿو، هڪ عام پيدائشي خرابي.Heterozygous SPECC1L ميوٽيشنز مليا آهن مريضن ۾ atypical ۽ syndromic clefts سان.هتي، اسان رپورٽ ڪريون ٿا وڌايل داغ جي ڪيننيڪل چپپڻ واري جنڪشن (AJ) اجزاء، β-catenin ۽ E-cadherin ڪلچر ٿيل SPECC1L دستڪ ڊائون سيلز ۾، ۽ اليڪٽران مائڪرو گرافس AJ جي apical-basal diffusion کي ڏيکاري ٿو.Craniofacial morphogenesis ۾ SPECC1L جي ڪردار کي سمجھڻ لاءِ، اسان ٺاھيو آھي Specc1l deficient مائوس ماڊل.Homozygous mutants جنين جي جان ليوا آهن ۽ نئرل ٽيوب جي بندش ۽ سي اين سي سي لامينيشن کي ظاهر ڪن ٿا.AJ پروٽين جو داغ ميوٽيٽ نيورل فولڊ ۾ وڌايو ويو آهي.هي AJ عيب CNCC delamination ۾ هڪ عيب سان مطابقت رکي ٿو، AJ تحلیل جي ضرورت آهي.ان کان سواء، اسپيڪ 11 ميوٽيونٽس PI3K-AKT سگنلنگ کي گھٽائي ڇڏيو ۽ اپوپيٽوسس وڌايو.ويٽرو ۾، جهنگلي قسم جي سيلز ۾ PI3K-AKT سگنلنگ جي نرم نمائش AJ تبديلين کي وڌائڻ لاء ڪافي هئي.خاص طور تي، SPECC1L knockdown پاران AJ تبديليون PI3K-AKT رستي جي چالو ڪرڻ سان رد ڪري سگھجن ٿيون.گڏ ڪيل، اهي ڊيٽا پيش ڪن ٿا ته SPECC1L، PI3K-AKT سگنلنگ ۽ AJ حياتيات جي هڪ ناول ريگيوليٽر جي طور تي، نيورل ٽيوب بندش ۽ سي اين سي سي جي استحڪام لاء گهربل آهي.
Cranial neural crest Cells (CNCCs) ڊورسل نيورو ايڪٽوڊرم کي مقامي بڻائين ٿا ۽ ترقي پذير نيورل فولڊز جي نيوروپيٿيليم کان ڌار ٿين ٿا هڪ عمل جي ذريعي جنهن ۾ ايپيٿيليل-ميسينچيمل ٽرانسشن (EMT) 1,2,3 شامل آهن.پريميگريٽنگ epithelial CNCCs intercellular junctions ۾ خلل وجهن ٿا ۽ لڏپلاڻ ڪندڙ mesenchymal CNCCs بڻجي وڃن ٿا جيڪي پهرين ۽ ٻئي pharyngeal arches کي ڀريندا آهن ۽ اڪثر ڪريانيوفيسيل ڪارٽيلج ٺاهيندا آهن.اهڙيءَ طرح، جين جيڪي سي اين سي سي جي ڪم کي منظم ڪن ٿا، اڪثر ڪريانيوفاشل جي پيدائشي انتشارات جي ايٽولوجي ۾ خلل پوي ٿو، جهڙوڪ orofacial clefts، عام طور تي صرف آمريڪا ۾ 1/800 جنمن کي متاثر ڪن ٿا.پيدائشي خرابين مان هڪ 8.
CNCC جو Delamination 8.5 ۽ 9.5 ڏينهن جي وچ ۾ اڳئين نيورل ٽيوب جي بندش سان ٺهڪي اچي ٿو.ڪيترن ئي ماؤس orofacial cleft سان لاڳاپيل جين جا ميوٽنٽ پڻ ڪجهه نموني جي نئرل ٽيوب جي خرابي کي ظاهر ڪن ٿا، جن ۾ Irf69,10، Ghrl310، Cfl111، ۽ Pdgfrα12 شامل آهن.بهرحال، نيورل ٽيوب جي بندش ۽ سي اين سي سي جي استحڪام جي عمل کي آزاد سمجهي سگهجي ٿو، جيئن اسپلوچ ميوٽنٽ ماؤس (Pax3) سي اين سي سي جي استحڪام يا لڏپلاڻ 13,14 تي ڪنهن به اثر کان سواء نيورل ٽيوب بندش ۾ خرابين کي ظاهر ڪري ٿو.اضافي ماؤس ماڊل سي اين سي سي ڊسڪشن ۽ نيورل ٽيوب جي بندش ۾ خرابين سان گڏ انهن ٻن عملن جي عام ماليڪيولر بنياد کي بيان ڪرڻ ۾ مدد ڪندا.
نيوروپيٿيليل سيلز مان سي اين سي سي جي ڌار ٿيڻ لاءِ چپڪندڙ جنڪشنز (AJs) جي تحليل جي ضرورت آهي، جيڪي پروٽين ڪمپليڪس تي مشتمل آهن، ٻين جي وچ ۾، E-cadherin، β-catein، α-E-catein، ۽ α-actinin جو تعلق actin filaments 2 سان آهي. اوور ايڪسپريشن مطالعو E-cadherin عصبي فولڊ ۾ CNCC delamination ۾ گهٽتائي يا دير ڏيکاري ٿي.ان جي ابتڙ، E-cadherin جي دٻائڻ جي نتيجي ۾ شروعاتي سطحن ۾ 15,16.ڪيترائي عنصر جيڪي CNCC جي استحڪام جي دوران EMT ۾ ثالث ڪن ٿا ٽرانسپشن فيڪٽرز (AP2α, Id2, FOXD3, SNAIL, TWIST, SOX10) ۽ extracellular matrix (ECM) ريموڊلنگ پروٽينس جهڙوڪ ميٽرڪس ميٽيلوپروٽينيز (MMPs) آهن، جڏهن ته CNCCs سڌي ريت آهن A cytoskeleators. اڃا تائين معلوم ناهي.PI3K-AKT رستو E-cadherin جي سطحن جي مخالفت ڪرڻ لاءِ سڃاتو وڃي ٿو، خاص طور تي ڪينسر جي تحقيق کان 17.تازيون اڀياس ڏيکاريا آهن ته PDGFα-based PI3K-AKT سگنلنگ جي نقصان جي چوٿن ۾ craniofacial غير معموليات، بشمول cleft palate ۽ neural tube defects12.بهرحال، PI3K-AKT رستي جي وچ ۾ لاڳاپا ۽ CNCC جي استحڪام تي AJ استحڪام واضح ناهي.
اسان اڳ ۾ SPECC1L کي ٻن ماڻهن ۾ پهريون ميوٽيٽ جين جي طور تي سڃاڻپ ڪيو آهي جيڪو هڪ سخت درار آهي جيڪو وات کان اک تائين پکڙيل آهي، جنهن کي oblique cleft (ObFC) يا Tessier IV18 cleft طور سڃاتو وڃي ٿو.SPECC1L ميوٽيشنز جي سڃاڻپ ڪئي وئي آهي ٻن گهڻ نسلي خاندانن ۾ آٽوسومل غالب Opitz G/BBB سنڊروم (OMIM #145410)، جنهن ۾ متاثر ٿيل ماڻهن ۾ هائپر ڊسٽنس ۽ cleft lip/palate19، ۽ هڪ خاندان ۾ Tibi overdistance syndrome سان گڏ (OMIM #14545) .Opitz G/BBB سنڊروم جا اڌ کان وڌيڪ ڪيس X-linked (OMIM #300000) آهن ۽ MID1 جين ۾ ميوٽيشنز جي ڪري ٿين ٿا، جيڪي مائڪروٽيوبول سان لاڳاپيل سيل اسڪيلٽن جي پروٽين 22 کي انڪوڊ ڪري ٿو.اسان اهو تصور ڪريون ٿا ته SPECC1L، پڻ هڪ پروٽين آهي جيڪو مائڪروٽيوبولس ۽ ايٽين سائٽوسڪليٽن سان لاڳاپيل آهي، سيل آسنجن ۽ لڏپلاڻ 18 دوران ايڪٽين سائٽوسڪليٽن ريموڊلنگ لاءِ گهربل سگنلنگ ۾ ثالثي ڪري سگھي ٿو.ويٽرو ۽ وييو مطالعي ۾، اسان هاڻي بيان ڪريون ٿا SPECC1L هڪ ناول ريگيوليٽر جي طور تي AJ استحڪام جي ذريعي PI3K-AKT سگنلنگ.سيلولر سطح تي، SPECC1L جي گھٽتائي جي نتيجي ۾ پين-AKT پروٽين جي سطح ۾ گهٽتائي ۽ AJ جي apical-basal dispersion ۾ اضافو ٿيو، جيڪو AKT رستي جي ڪيميائي چالو ذريعي ختم ٿي ويو.vivo ۾، Specc11-deficient embryos ڏيکارين ٿا خراب ٿيل نيورل ٽيوب جي بندش ۽ گھٽجي وئي CNCC ڊسڪشن.اهڙيء طرح، SPECC1L ڪم ڪري ٿو انتهائي ضابطو ڪيل سيل آسنجن تي ٻڌل سگنلنگ ۾ عام CNCC فنڪشن لاءِ گهربل مورفوگنيسيس دوران.
سيلولر سطح تي SPECC1L جي ڪردار کي نمايان ڪرڻ لاء، اسان اڳ ۾ بيان ڪيل مستحڪم osteosarcoma سيل لائن U2OS استعمال ڪيو SPECC1L18 ۾ گھٽتائي.اهي مستحڪم U2OS سيلز SPECC1L (kd) knockdown سان گڏ SPECC1L ٽرانسڪرپٽس ۽ پروٽين جي سطحن ۾ هڪ معتدل (60-70٪) گهٽتائي هئي، لڏپلاڻ ۾ خرابين سان گڏ ۽ ايڪٽين سائٽوسڪليٽن 18 جي ​​بحالي ۾، ان جي ابتڙ، هڪ سخت عارضي گهٽتائي. SPECC1L ڏيکاريو ويو آهي mitotic عيب 23 جي اڳواڻي ۾.وڌيڪ خاصيتن تي، اسان ڏٺو ته اسان جي مستحڪم SPECC1L-kd سيلن جي سنگم جي تمام اعلي درجي تي مورفولوجي کي تبديل ڪيو (شڪل 1).گھٽ سنگم تي انفرادي ڪنٽرول سيلز ۽ ڪي ڊي سيلز ساڳيا نظر اچن ٿا (شڪل 1A، D).فيوزن کان 24 ڪلاڪ پوءِ، ڪنٽرول سيلز پنهنجي ڪعبي جي شڪل کي برقرار رکيو (تصويري 1B، E)، جڏهن ته SPECC1L-kd سيلز ڊگھا ٿي ويا (تصوير 1C، F).سيل جي شڪل ۾ هن تبديلي جي حد تائين ڪنٽرول سيلز ۽ ڪي ڊي سيلز (فلم 1) جي vivo لائيو اميجنگ ۾ قبضو ڪيو ويو.سنگم خاني ۾ SPECC1L جي ڪردار کي طئي ڪرڻ لاء، اسان پهريون ڀيرو ان جي اظهار جي جانچ ڪئي.اسان ڏٺا ته SPECC1L پروٽين جي سطح فيوزن تي وڌي وئي (شڪل 1G)، جڏهن ته SPECC1L ٽرانسڪرپٽ جي سطح نه وڌي وئي (شڪل 1H).ان کان علاوه، جيئن سيل جي کثافت ۾ اضافو ٿيو، SPECC1L پروٽين انٽرسيلولر حدن تي گڏ ڪيو ويو (Fig. 2A-E)، هڪ نموني سان گڏ جھلي سان لاڳاپيل β-catein (Fig. 2A'-E').ڏنو ويو SPECC1L جي وابستگي سان actin cytoskeleton 18,23 اسان اهو سمجهيو ته SPECC1L عملن تي ٻڌل چپپڻ واري جنڪشن (AJ) سان رابطو ڪري ٿو.
(AF) SPECC1L knockdown (DF) سيلز اعلي سنگم (F) تي ڪنٽرول U2OS سيلز (AC) جي مقابلي ۾ وڌائين ٿا.ھتي ڏيکاريل ڇھ ٽائم پوائنٽن مان ٽي آھن (T1, T3, T6) جن کي اسان مختلف سيل جي کثافت لاءِ چونڊيو آھي.(G) مغربي بلٽ جو تجزيو ڏيکاري ٿو ته SPECC1L پروٽين ڪنٽرول سيلز ۾ سنگم جي گهٽ درجي جي مقابلي ۾ سنگم جي اعلي درجي تي مستحڪم آهي.SPECC1L جو مغربي بلٽ ڏيکاري ٿو متوقع 120 kDa بينڊ ۽ هڪ اعلي ماليڪيولر ويٽ بينڊ، ممڪن طور تي پوسٽ-ترجمي سان تبديل ٿيل (*).مغربي بلٽ تجزيو ساڳئي حالتن هيٺ گهٽ ۽ اعلي سنگم لاء ڪيو ويو.تصويرون ڏيکاريل SPECC1L گھٽ ۽ مٿاھين سنگم تي ھڪڙي ئي بلٽ مان ورتيون ويون آھن.ساڳيو داغ هٽايو ويو ۽ β-actin اينٽي باڊي سان ٻيهر جانچيو ويو.(H) مقداري RT-PCR تجزيي SPECC1L ٽرانسڪرپٽ جي سطحن ۾ ڪا خاص تبديلي نه ڏيکاري.نقص بار چار آزاد تجربن مان SEMs جي نمائندگي ڪن ٿا.
(AE) اسان ڇھ ٽائم پوائنٽس (T1-T6) چونڊيو جيڪي سيل جي کثافت جي ھڪڙي حد جي نمائندگي ڪن ٿا سيل جي شڪل جي تجزيي کي عام ڪرڻ ۽ U2OS سيلز ۾ AJ تبديلين کي SPECC1L knockdown (kd) سان.ان وقت جي پهرين پنجن پوائنٽن ۾ سنگل سيلز (T1)، 50-70٪ فيوزن آف ٿل سيل ڪلسٽرز (T2)، فيوزن بغير ڪي ڊي سيلز (T3) کي تبديل ڪرڻ، ڪي ڊي سيلز (T4) کي تبديل ڪرڻ، ۽ 24 ڪلاڪ تبديليون شامل آهن.kd (T5) سيلز جي پوئين شڪل ۾.SPECC1L پروٽين بنيادي طور تي T1 (A) تي cytoplasm ۾ منتشر ڪيو ويو، پر ان جي جمع ٿيڻ واري وقت جي پوائنٽن (B-E، تير) تي انٽرسيلولر حدن تي ڏٺو ويو.(FJ) β-catenin AJ ڪمپليڪس سان لاڳاپيل انٽرسيلولر حدن تي ساڳيو جمع ڏيکاري ٿو.(A'-E') SPECC1L ۽ β-catein ڏيکاريو اوورليپنگ داغ سيل جي سرحدن تي اعلي سيل جي کثافت تي (تير).(F'-J') SPECC1L-kd خاني ۾، β-ڪيٽينن جو داغ گهٽ سيل جي کثافت (F'-H') تي معمولي نظر اچي ٿو، پر سيل جي شڪل جي تبديلين جي طور تي وڌايو وڃي ٿو (I', J'؛ تير)، ظاهر ڪري ٿو ته AJ تبديل ٿي ويا آهن.بار = 10 µm.
اسان وري AJ تي SPECC1L جي گھٽتائي جو اثر طئي ڪرڻ جي ڪوشش ڪئي.اسان ڪيترن ئي AJ سان لاڳاپيل نشانن کي استعمال ڪيو، جن ۾ معياري اجزاء F-actin، myosin IIb، β-catein، ۽ E-cadherin24,25,26,27 شامل آهن.SPECC1L-kd سيلز ۾ Actin اسٽريس فائبر وڌي ويا جيئن اڳ بيان ڪيو ويو آهي (Fig. 3A,B) 18.Myosin IIb actin filaments سان جڙيل SPECC1L-kd سيلز ۾ ويٽرو (تصوير 3C،D) ۾ ساڳئي واڌ ڏيکاري ٿي.AJ سان لاڳاپيل β-catein سيل جھلي تي ڪيڊرين سان جڙيل آهي، ڪنٽرول ڪيوبوسائٽس ۾ هڪ عام "honeycomb" اظهار جو نمونو ڏيکاري ٿو (Fig. 3E,G).دلچسپ ڳالهه اها آهي ته فليٽ تصويرن ۾ confocal microscopy استعمال ڪندي، β-cadherin (Fig. 3E,F) ۽ E-cadherin (Fig. 3G,H) سنگم SPECC1L جي گھٽتائي واري سيلز جي سيل جھلي تي داغ، وڌايل داغ جا نمايان نمونا ڏيکاريا ويا.Kd سيلز ۾ AJ سان لاڳاپيل β-catenin داغ جي اها توسيع سنگم تي سڀ کان وڌيڪ واضح هئي، پر سيل جي شڪل ۾ تبديلين کان اڳ ظاهر ٿيو (تصوير 2F-J، F'-J').ھن وڌايل AJ داغ جي جسماني نوعيت کي طئي ڪرڻ لاءِ، اسان SPECC1L-kd U2OS سيلز جي apical-basal مٿاڇري تي سيل جي سرحدن کي ٽرانسميشن اليڪٽران مائڪروسکوپي (TEM) (شڪل 3I، J) ذريعي جانچيو.ڪنٽرول سيلز (Fig. 3I) جي برعڪس، جن ۾ AJ (تير) جا الڳ الڳ اليڪٽران گھڻا علائقا هئا، kd سيلز (Fig. 3J) ڏيکاريا وڏا، ملندڙ علائقا AJ جي اعلي اليڪٽران جي کثافت جي اشاري سان گڏ apicobasal جهاز سان..ان کان علاوه، ٽرانسورس حصن تي، اسان ڏٺو ته وسيع سيل جھلي جي فولڊ ۾ kd سيلز (Fig. S1A، B)، جيڪو وضاحت ڪري ٿو β-catenin ۽ E-cadherin staining bands (Fig. 3F، H).AJs ۾ SPECC1L جي ڪردار جي حمايت ۾، β-catenin SPECC1L سان گڏ گڏيل U2OS سيلز (Fig. 3K) جي ليسيٽس ۾ گڏيل مدافعتي ڪئي وئي.AJ مارڪرز لاءِ وڌايل اموناسٽيننگ سان گڏ، TEM تجزيو اسان جي نظريي سان مطابقت رکي ٿو ته SPECC1L جي گھٽتائي AJ apical-basal density ۽ variance وڌائي ٿي.
(AH) 48 ڪلاڪ پوسٽ فيوزن (T6؛ A، B) ۾ ڪي ڊي سيلز ۾ F-actin جي داغ کي وڌايو.F-actin (C، D) سان لاڳاپيل myosin IIb جو بدليل داغ.β-catenin ۽ E-cadherin membrane staining in control cells (E, G) جو هموار نمونو SPECC1L-kd (F, H) سيلز ۾ وڌايو ويو.بار = 10 µm.(I-J) اليڪٽران مائڪرو گرافس جو مشاهدو ڪندڙ apical-basal intercellular junction.ڪنٽرول سيلز مختلف اليڪٽران-گھڻ وارا علائقا ڏيکاريندا آهن جيڪي چپچپا جنڪشن (I، تير) جي نشاندهي ڪن ٿا.ان جي ابتڙ، SPECC1L-kd سيلز ۾ سڄو apical-basal junction ظاهر ٿيو اليڪٽران ڊينس (J، تير)، وڌندڙ کثافت ۽ چپکندڙ جنڪشن جي ڦهلائڻ جو اشارو.(K) β-catenin SPECC1L سان گڏ گڏيل U2OS سيل ليسيٽس ۾ گڏيل مدافعتي ڪئي وئي.تصوير ھڪڙي جڳھ تان ورتي وئي آھي جيڪا چار آزاد تجربن مان ھڪڙي جي نمائندگي ڪري ٿي.
Craniofacial morphogenesis ۾ SPECC1L جي ڪردار کي سمجھڻ لاءِ، اسان ھڪ Specc1l deficient مائوس ماڊل ٺاھيو آھي ٻن آزاد ES ٽريپ سيل لائينز، DTM096 ۽ RRH048 (BayGenomics، CA) کي استعمال ڪندي، جيڪي intron 1 جي نمائندگي ڪن ٿا ۽ Specc1l ٽرانسڪرپٽس کي Fig15 تي قبضو ڪيو ويو. .4A، شڪل S2).Decoy vector insert جي جينومڪ مقام پوري جينوم جي ترتيب سان طئي ڪئي وئي ۽ PCR (Fig. S2) جي تصديق ڪئي وئي.ٻنهي جين ٽرپ ڊيزائن کي پڻ اجازت ڏني وئي فريم فيوزن جي اسپيڪ 11-lacZ رپورٽرن کي پڪڙڻ تي.تنهن ڪري، X-gal staining پاران مقرر ڪيل lacZ اظهار Specc11 اظهار جي اشاري طور استعمال ڪيو ويو.ٻئي ايلليز هڪجهڙا lacZ ايڪسپريشن نمون ڏيکاريا آهن، انٽرون 1 ۾ DTM096 جين ٽريپ انٽرون 15 ۾ RRH048 کان وڌيڪ مضبوط اظهار ڏيکاري ٿو (نه ڏيکاريل آهي).بهرحال، اسپيڪ 1 ايل وڏي پيماني تي اظهار ڪيو ويو آهي، خاص طور تي مضبوط اظهار سان نيورل فولڊ ۾ E8.5 (شڪل 4B)، نيورل ٽيوب ۾ ۽ E9.5 ۽ E10.5 (Figure 4C،D) تي منهن جي عملن ۾، ۽ ترقي پذير عضون ۾. E10 تي.5 ۽ اکيون (شڪل 4D).اسان اڳ ۾ ٻڌايو آهي ته SPECC1L اظهار E10.5 تي پهرين فرينجيل آرڪ ۾ موجود هو epithelium ۽ هيٺيون mesenchyme18 ۾، CNCC نسب سان مطابقت.CNCC ۾ SPECC1L اظهار کي جانچڻ لاءِ، اسان ڪيو E8.5 نيورل فولڊ (Figure 4E-J) ۽ E9.5 کوپڙي جا حصا (Figure 4K-).E8.5 تي، SPECC1L نيورل فولڊ کي شدت سان داغ ڪيو (تصوير 4E، H)، بشمول اين سي سي مارڪرز سان داغ ٿيل سيلز (تصوير 4G، J).E9.5 تي، SPECC1L (Fig. 4K، N) AP2A (Fig. 4L، M) يا SOX10 (Fig. 4O، P) سان گڏ مضبوط داغ لڏپلاڻ ڪندڙ CNCC co-stained.
(الف) ماؤس جي اسڪيمياتي نمائندگي Specc11 جين ڏيکاريندي ڊيڪو ویکٹر داخل ڪرڻ ES DTM096 (intron 1) ۽ RRH048 (intron 15) سيل ڪلون ۾.(BD) lacZ staining of heterozygous Specc1lDTM096 جنين جو Specc1l اظهار E8.5 کان E10.5 تائين.NE = neuroectoderm، NF = neural fold، PA1 = پهريون pharyngeal arch.(EP) E8.5 (NF؛ EJ) نيورل فولڊز ۽ E9.5 (KP) کوپڙي حصن ۾ NCC مارڪرز AP2A ۽ SOX10 سان SPECC1L اموناسٽيننگ.SPECC1L داغ وڏي پيماني تي ڏٺو ويو نيورل فولڊس E8.5 (E, H; arrowheads) ۾، جنهن ۾ AP2A (F, G; arrowheads) ۽ SOX10 (I, J; arrowheads) سان ليبل ٿيل سيلز شامل آهن.E9.5 تي، SPECC1L مضبوط طور تي داغدار لڏپلاڻ ڪندڙ CNCCs (K, N; arrows) ليبل ٿيل AP2A (L, M; arrows) ۽ SOX10 (O, P; arrows).
heterozygous Specc1lDTM096/+ ۽ Specc1lRRH048/+ چوٿين جي وچ ۾ ڪراس ڪرڻ ڏيکاري ٿو ته ٻه جين ٽريپ ايلليس مڪمل نه آهن ۽ اهي مرڪب heterozygotes ۽ embryonic homozygotes ڪنهن به جين ٽريپ ايللي لاءِ ايمبريونڪ ليٿل آهن (ٽيبل S1).Mendelian ratios ظاھر ڪيو آھي ته پيدائش جي وقت heterozygotes جي بقا جي شرح ۾ گھٽتائي (متوقع 1.34 بمقابلہ 2.0).اسان هيٽرروزائيگوٽس جي وچ ۾ گهٽ ڄمڻ واري موت جي شرح کي نوٽ ڪيو، ڪجهه کي craniofacial anomalies (تصوير S3).بهرحال، انهن پرينيٽل ڪرنيوفائيل فينوٽائپس جي گهٽ دخول انهن جي بنيادي pathophysiological ميڪانيزم جو مطالعو ڪرڻ ڏکيو بڻائي ٿو.تنهن ڪري، اسان homozygous Specc11 mutants جي جنين جي جاندار فينوٽائپ تي ڌيان ڏنو.
گھڻا مرڪب heterozygous يا homozygous Specc1lDTM096/RRH048 ميوٽيٽ ايمبريوز E9.5-10.5 (Figs. 5A-D) کان پوءِ ترقي نه ڪيا، ۽ نيورل ٽيوب اڳئين طور بند نه ٿيا (Figs. 5B, D) ۽ ڪڏهن ڪڏهن پوئين طرف بند نه ٿيا (نه ڏيکاريل) ..هي ڪنريل نيورل ٽيوب بندش خرابي سان لاڳاپيل هئي سي اين سي سي جي اڪثريت سان نشان لڳل DLX2 E10.5 تي نيورل فولڊ ۾ باقي رهي ٿي، ظاهر نه ڪيو ويو ڪو به ڊسڪشن (Figure 5A'-D').اهو طئي ڪرڻ لاءِ ته CNCC جي مجموعي سائيز پڻ گھٽجي وئي هئي، اسان ٽيگ ڪيو CNCC لائينون GFP سان اسان جي جين ٽرپ لائينن ۾ Wnt1-Cre ۽ ROSAmTmG سان.اسان سڄي جنين مان ترتيب ڏنل GFP+ NCC ۽ GFP- (RFP+) غير NCC کي وهڪرو ڪريون ٿا.E9.5 تي، وهڪري جي ترتيب ڏنل GFP-ليبل ٿيل CNCCs جو تناسب WT ۽ mutant embryos جي وچ ۾ خاص طور تي تبديل نه ٿيو (نه ڏيکاريو ويو)، عام CNCC وضاحتن کي ظاهر ڪري ٿو.تنهن ڪري، اسان اهو سمجهيو آهي ته بي نقاب ٿيل نيورل فولڊ (Figure 5B') ۾ بقايا Wnt1-Cre ۽ DLX2 داغ، خراب CNCC پرت جي ڪري، ممڪن طور تي AJ سيلز جي کثافت يا ڦهلائڻ جي ڪري، جيئن SPECC1L-kd سيلز ۾ ڏٺو ويو آهي.اسان اين سي سي مارڪر استعمال ڪيو SOX10، AP2A، ۽ DLX2 نيورل فولڊ ۾ CNCC جي موجودگي جي تصديق ڪرڻ لاءِ (شڪل 5E-R).E8.5 تي، سڀني ٽن اين سي سي مارڪرن لاء نيورل فولڊ اسٽيننگ WT (Fig. 5E، G، I) ۽ Specc1l mutant (Fig. 5F، H، J) جي حصن ۾ ڏٺو ويو.E9.5 تي، جڏهن ته اين سي سي مارڪرز WT حصن ۾ لڏپلاڻ ڪندڙ اين سي سي کي داغدار ڪيو (تصويري 5M، O، Q)، بقايا اين سي سي جي داغ اسپيڪ 1l ميوٽنٽ ايمبريوس (تصوير 5N، P، R) جي بي نقاب اعصابي فولڊ ۾ ڏٺو ويو.ڇاڪاڻ ته SOX10 ۽ DLX2 نشان لڏپلاڻ ڪندڙ CNCCs، هي نتيجو اهو ظاهر ڪري ٿو ته SPECC1L-deficient CNCCs پوسٽ لڏپلاڻ جي وضاحت حاصل ڪن ٿا پر نيورل فولڊ مان لڏپلاڻ ڪرڻ ۾ ناڪام ٿين ٿيون.
اسپيڪ 11 جي گھٽتائي خراب نيرل ٽيوب جي بندش جي ڪري ٿي، ڪنيئل نيورل ڪرسٽ سيلز ۽ AJs کي ختم ڪرڻ.
(A, B') E9.5 WT (A) ايمبريو کڻندڙ لڏپلاڻ ڪندڙ ڪنيئل نيورل ڪرسٽ سيلز (CNCC) Wnt1-Cre (A') سان ليبل ٿيل.ان جي ابتڙ، اسپيڪ 11 ميوٽيٽ ايمبريوز کليل نيورل فولڊز (B)، تير هيڊز) ۽ سي اين سي سيز ڏيکاريندا آهن جيڪي لڏپلاڻ نه ڪيا آهن (B'، تير هيڊز).(C, D') روشن فيلڊ تصويرون (C, D') ۽ Immunostaining (C', D') CNCC مارڪر DLX2 جي E10.5 WT جنين (C, C') ۽ Specc1l (D, D').WT E10.5 جنين ۾، DLX2-Positive CNCC گلن جي محرابن (C'، تير) کي ڪالونائيز ڪري ٿو، جڏهن ته ميوٽنٽ ۾، نمايان داغ کليل اعصابي فولڊز (D'، تير) ۾ ۽ پهرين فرينجيل آرچز (D' ۾، تير).) ڪجهه داغ سان (تير) سي اين سي سي جي خراب ڊيليشن ۽ لڏپلاڻ جو اشارو ڏئي ٿو.ER) مرحلن ۾ WT ۽ Specc1l ميوٽيٽ ايمبريوز جا حصا E8.5 (E-L) ۽ E9.5 (M-R) NCC مارڪر SOX10 (E, F, M, N), AP2A (G, H,) سان ليبل ڪيا ويا. O، P) ۽ DLX2 (I، J، Q، R).E8.5 تي، اين سي سي جي داغ کي جهنگلي قسم جي نيورل فولڊ (NF) ۽ ميوٽيٽ سيڪشن ۾ ڏٺو ويو.E8.5 WT (K) ۽ ميوٽنٽ (L) ۾ SOX10 ۽ β-ڪيٽينن جو گڏيل داغ ظاهر ڪيو ويو آهي ته وڌيل β-ڪيٽينن جي داغ کي سيل جي حدن تي نيورل فولڊ ۾.E9.5 تي، لڏپلاڻ ڪندڙ CNCCs (M, O, Q) جي جهنگلي قسم جي داغ جو مشاهدو ڪيو ويو، جڏهن ته ميوٽنٽ ۾، اڻڄاتل CNCCs داغ کليل نيورل فولڊ (N، P، R).(S-Z) WT ۽ Specc11DTM096/RRH048 جنين جي ڪورونل حصن ۾ ويوو AJ ليبلنگ تجزيو E9.5 ميوٽيشن سان.هڪ تقريبن سيڪشنل جهاز مٿي ساڄي ڪنڊ ۾ ڏيکاريل آهي.ميوٽيٽ ٽشوز جي حصن ۾، F-actin (S, T) ۽ myosin IIb (U, V) جي وڌندڙ داغ کي ڏٺو ويو.تصوير 3 ۾ ويٽرو نتيجن وانگر، ميوٽيٽ ايمبريوز ۾، β-ڪيٽينن (W، X) ۽ E-cadherin (Y، Z) لاءِ وڌايل جھلي جي داغ کي ڏٺو ويو.(AA-BB) هڪ جهنگلي قسم جي جنين جي هڪ حصي جو هڪ اليڪٽران مائڪروگراف apical-basal cell جي سرحد کان ٻاهر ڏسڻ ۾ اچي ٿو هڪ الڳ اليڪٽران-گھڻ علائقو ڏيکاري ٿو چپڪندڙ جنڪشنن جو اشارو (AA، تير).ان جي ابتڙ، Specc11 mutant embryos (BB، arrows) جي حصن ۾، سڄو apicobasal junction اليڪٽران dense آهي، جنهن کي ظاهر ڪري ٿو وڌندڙ کثافت ۽ Adhesive junctions جي پکيڙ.
اسان جي مفروضي کي جانچڻ لاءِ ته پرت جي گھٽتائي بدليل AJ جي ڪري آهي، اسان اسپيڪ 1l ميوٽنٽ ايمبريوس (Fig. 5S-Z) جي بي نقاب ٿيل نيورل فولڊ ۾ AJ ليبلنگ کي جانچيو.اسان ڏٺو ته ايڪٽين اسٽريس فائبرز ۾ اضافو ٿيو (Fig. 5S, T) ۽ ايڪٽين فائبرز (Fig. 5U, V) تي مائيوسين IIB جي داغ جي جڳه ۾ اضافو ٿيو.خاص طور تي، اسان ڏٺو ته β-catein (Fig. 5W,X) ۽ E-cadherin (Fig. 5Y,Z) جي داغ وڌي وئي انٽرسيلولر حدن تي.اسان E8.5 جنين جي نيورل فولڊ ۾ اين سي سي جي β-ڪيٽينين اسٽيننگ کي پڻ جانچيو (Fig. 5K، L).β-catenin داغ ظاهر ٿي مضبوط ٿي اسپيڪ 1l ميوٽنٽ نيورل فولڊ (Fig. 5L ۽ K) ۾، اهو مشورو ڏئي ٿو ته AJ تبديليون شروع ٿي چڪيون آهن.E9.5 جنين جي کوپڙي جي حصن جي اليڪٽران مائڪرو گرافس ۾، اسان وري ڏٺو ته WT (Fig. 5AA، BB ۽ S1E-H) جي مقابلي ۾ Specc1l mutant embryos ۾ ڊفيوز اليڪٽران-گھڻ داغ وڌي ويا.گڏ ڪيا ويا، اهي نتيجا اسان جي ان ويٽرو نتيجن کي سپورٽ ڪن ٿا SPECC1L-kd U2OS سيلز ۾ ۽ تجويز ڪن ٿا ته AJ جي غير معمولي اسٽيننگ اسان جي ميوٽنٽ جنين ۾ CNCC جي استحڪام کان اڳ آهي.
AKT سرگرمي ۽ E-cadherin جي استحڪام جي وچ ۾ ڄاڻايل متضاد تعلق، 17,28 اسان کي PI3K-AKT سگنلنگ جي شموليت جو اندازو لڳايو.ان کان علاوه، اسان ڏٺو آهي ته اسان جي ڪجهه ميوٽيٽ جنين ۾ subepidermal blistering جيڪي موت کان بچي ويا (<5٪) E9.5-10.5 تي ۽ ان جي بدران تقريباً E13.5 (Fig. S3) تي آباد ٿيا.Subepidermal vesicles PDGFRα12 تي ٻڌل PI3K-AKT سگنلنگ جي گھٽتائي جو نشانو آھن.Fantauzzo et al.(2014) ٻڌايو ويو آهي ته PDGFRα-based PI3K ايڪٽيويشن ۾ خلل PdgfraPI3K/PI3K ميوٽيٽ ايمبريوز جي نتيجي ۾ subepidermal vesicles، neural tube defects، ۽ cleft palate phenotypes.درحقيقت، پين-AKT ۽ فعال فاسفوريليٽڊ Ser473-AKT جي سطح گھٽائي وئي vivo ۾ Specc1l mutant tissues ۾ E9.5 embryonic گرفتاري (Fig. 6A-D).فاسفوريليٽڊ Ser473-AKT جي سطحن ۾ گهٽتائي مڪمل طور تي وييو (FIG. 6E) ۽ ويٽرو (FIG. 6F) ۾ pan-AKT جي سطحن ۾ گهٽتائي سبب ٿي سگهي ٿي.هڪ ان ويٽرو گهٽتائي صرف تڏهن ڏٺو ويو جڏهن U2OS سيلز سيل جي شڪل ۽ AJ کثافت ۾ تبديلين سان مضبوط طور تي سنگم هئا (شڪل 6D).اهڙيء طرح، اسان جي ڊيٽا جو مشورو ڏئي ٿو ته SPECC1L هڪ ناول مثبت ريگيوليٽر آهي PI3K-AKT سگنلنگ جو craniofacial morphogenesis ۾.
(A-E) E8.5 (A,B) ۽ E9.5 (C,D) کوپڙي جا حصا يا E9.5 lysates Specc1l mutant embryos (E) مان ڏيکاريل سطحون فعال فاسفوريليٽ S473-AKT ۽ pan-AKT پروٽين جي گھٽتائي ، ڪنٽرول WT جي مقابلي ۾.مغربي blotting ساڳئي حالتن هيٺ جهنگلي قسم جي lysates ۽ mutant lysates تي ڪيو ويو.SPECC1L لاءِ ڏيکاريل تصويرون ھڪڙي داغ مان ورتيون ويون.ساڳيو داغ هٽايو ويو ۽ اينٽي پين-ACT ۽ β-actin اينٽي باڊيز سان ٻيهر جانچيو ويو.E8.5 نيورل فولڊ (A، B) ۾ پان-AKT جي سطح ۽ E9.5 کوپڙي حصن ۾ فاسفوريلڊ S473-AKT جي سطحن کي خاص طور تي گھٽايو ويو.(F) Pan-AKT سطحون ساڳيءَ طرح گھٽجي ويون SPECC1L-kd U2OS سيلز جي lysates ۾ جيڪي اعلي سنگم تي حاصل ڪيا ويا.نقص بار ٽن آزاد مغربي بلٽ مقدار جي SEMs جي نمائندگي ڪن ٿا.(GJ) E9.5 تي WT جنين جا حصا KI67 سان داغدار ۽ ڪليو ٿيل ڪئسپيس 3، ترتيب سان، سيل جي ڦهلائي ڏيکاريندي (G، G') ۽ ٿوري اپوپٽوٽڪ سرگرمي (H، H').اسپيڪ 11 ميوٽيٽ ايمبريوز نسبتا سيل جي واڌ ويجهه (I) ڏيکاري ٿو، پر اپوپٽوسس جي ذريعي سيلز جو تعداد خاص طور تي وڌايو ويو آهي (J).
اسان ان کان پوء جانچيو ته نشانن جي پيداوار ۽ apoptosis.اسان E9.5 جنين (I جي مقابلي ۾ تصوير 6E، G) جي واڌ ويجهه ۾ ڪو به فرق نه ڏٺو آهي، جنهن ۾ 82.5٪ WT ميوٽنٽ لاءِ پروليريشن انڊيڪس ۽ 86.5٪ Specc1l mutants لاءِ KI67 اسٽيننگ (p <0.56، فشرز صحيح ٽيسٽ).اهڙي طرح، اسان اپوپٽوسس ۾ ڪو به فرق نه ڏٺو آهي cleaved caspase 3 لاءِ داغ لڳڻ سان E8.5 تي نيورل فولڊ ۾ ايستائين جو جنين جي گرفتاري (نه ڏيکاريل) (نه ڏيکاريل).ان جي ابتڙ، apoptosis تمام E9.5 mutant embryos (تصوير 6F، H ۽ J) ۾ خاص طور تي وڌي ويو.apoptosis ۾ ھي مجموعي واڌ گھٽايل PI3K-AKT سگنلنگ ۽ ابتدائي جنين جي موت 29,30,31 سان برابر آھي.
اڳيون، اسان جي ڪي ڊي سيلز ۾ AJ تبديلين ۾ PI3K-AKT سگنلنگ جي سبب جي ڪردار جي تصديق ڪرڻ لاء، اسان ڪيميائي طور تي ڪنٽرول ۽ ڪي ڊي سيلز ۾ رستو تبديل ڪيو (شڪل 7A-F).اسان مارڪر طور استعمال ڪيو سيل جي شڪل جي تبديلي فينوٽائپ کي سنگم SPECC1L-kd سيلز ۾ مشاهدو ڪيو ويو آهي، جنهن کي اسان استعمال ڪيو مقدار کي استعمال ڪندي سڀ کان ڊگھي طول و عرض (ڊگھائي) سان لاڳاپيل عمودي طول و عرض (چوڪر).1 جو تناسب نسبتا گول يا ڪبوڊيل سيلز (شڪل 7G) لاء متوقع آهي.سيل جي شڪل جي علاوه، اسان پڻ تصديق ڪئي AJ تي اثر β-catenin staining (Fig. 7A'-F').wortmannin استعمال ڪندي PI3K-AKT رستي جي نمائش ڪنٽرول سيلز (شڪل 7A، سي) ۽ AJ (شڪل 7A) ۾ سيل جي شڪل کي تبديل ڪرڻ لاء ڪافي هئي.PI3K-AKT ايڪٽيوٽر SC-79 سيل جي شڪل کي متاثر نه ڪيو (FIG. 7A، E) يا AJ توسيع (FIG. 7A') ڪنٽرول سيلز ۾.SPECC1L-kd سيلز ۾، PI3K-AKT رستي جي وڌيڪ دٻائڻ جي نتيجي ۾ وڌايو ويو apoptosis (Fig. 7B,D) ۽ β-catein staining (Fig. 7B') ۾ نمايان اضافو، اسان جي vivo Heavy mutants سان مطابقت.خاص طور تي، PI3K-AKT رستي جي چالو کي خاص طور تي بهتر سيل جي شڪل (Figure 7B،F) ۽ AJ فينوٽائپس (شڪل 7B").سيل جي شڪل ۾ تبديلين جي مقدار کي سيل گول جي تناسب (سي سي آر) جي طور تي وڌايو ويو ۽ اهميت جي مقابلي ۾ جيئن مٿي بيان ڪيو ويو آهي (FIG. 7G).درحقيقت، ڪنٽرول سيلز ۾ (Fig. 7G، CCR = 1.56)، wortmannin علاج خاص طور تي سيل جي شڪل کي تبديل ڪرڻ لاء ڪافي هو (Fig. 7G، CCR = 3.61، p <2.4 × 10-9). SPECC1L ۾.-kd سيلز (Fig. 7G، CCR = 3.46).SPECC1L-kd سيلز جو Wortmannin علاج (Fig. 7G، CCR = 3.60، negligible) untreated kd سيلز (Fig. 7G، CCR = 3.46، negligible) يا wortmannin-treated control cell (Fig. 7G) کان وڌيڪ اهم نه هو.، CCR = 3.46، negligible) اضافي طور تي سيل جي ڊگھائي کي متاثر ڪري ٿو (7G، CCR = 3.61، negligible).سڀ کان وڌيڪ اهم، SC-79 AKT ايڪٽيوٽر SPECC1L-kd سيلز جي ڊگھي فينوٽائپ کي بحال ڪيو (Fig. 7G، CCR = 1.74، p <6.2 × 10-12).انهن نتيجن جي تصديق ڪن ٿا ته SPECC1L PI3K-AKT سگنلنگ کي منظم ڪري ٿو ۽ تجويز ڪيو ته SPECC1L ۾ هڪ معتدل گهٽتائي سيل جي آسن کي متاثر ڪري ٿي، جڏهن ته مضبوط گهٽتائي apoptosis جي ڪري ٿي (تصوير 8).
(A-F') ڪنٽرول (A, C, E) ۽ SPECC1L-kd (B, D, F) سيلز جو علاج ڪيو ويو PI3K-AKT رستي جي روڪٿام وارن سان علاج .غير علاج ٿيل ڪنٽرول سيلز عام β-cat سيلولر اسٽيننگ (A') سان گڏ ڪبوائيڊل (A) آهن، جڏهن ته kd سيلز (B) وڌيل β-cat staining (B') سان وڌيل آهن.PI3K-AKT رستي کي دٻائڻ کان پوءِ، ڪنٽرول سيلز (C) β-cat جي توسيع (C') سان ڊگھا ٿي ويا، جڏهن ته kd سيلز اپوپٽوسس (D) کان گذرڻ شروع ڪيا، اسان جي انتهائي ميوٽيٽ ٿيل جنين وانگر ۽ انتهائي بهتر ڪيل β-cat ڏيکاريندي.داغ (D').PI3K-AKT رستي جي چالو ٿيڻ کان پوء، ڪنٽرول سيلز cuboidal (E) رهيون آهن ۽ عام β-cat (E') داغدار هئا، جڏهن ته kd سيلز سيل جي شڪل (F) ۽ β-cat (F') جي داغ کي نمايان طور تي بهتر نموني ڏيکاري ٿي، اشارو ڪندي (G) (AF) ۾ سيل جي شڪل جي تبديليءَ جو درجو مقدار ڪيو ويو سيل گولائي تناسب (سي سي آر) جي ڊگھي طول و عرض (ڊگھائي) ۽ لاڳاپيل عمودي طول و عرض (چوڪر) استعمال ڪندي MetaMorph سافٽ ويئر استعمال ڪندي.غير علاج ٿيل (NT) SPECC1L-kd سيلز (CCR = 3.46) خاص طور تي ڪنٽرول سيلز (CCR = 1.56، p <6.1 × 10-13) کان گهڻو ڊگهو هئا.ڪنٽرول سيلز ۾ PI3K-AKT رستي جي وورت جي نمائش سيل جي شڪل ۾ هڪجهڙائي وڌائڻ لاء ڪافي هئي (سي سي آر = 3.61، پي <2.4 × 10-9).اهڙي طرح، AKT ايڪٽيويشن پاران SC-79 SPECC1L-kd سيلز ۾ سيل جي وڌائڻ کي ڪنٽرول جي سطح تي بحال ڪيو (CCR = 1.74، p <6.2 × 10-12).SPECC1L-kd سيلز جي Wortmannin علاج جي نتيجي ۾ apoptosis ۾ اضافو ٿيو پر سيل جي شڪل ۾ وڌيڪ اضافو نه ٿيو (CCR = 3.60) غير علاج ٿيل kd (CCR = 3.46، ns) يا wortmannin-علاج ٿيل ڪنٽرول سيلز (3.61) جي مقابلي ۾.ns = فرق نٿو پوي.+/- SEM ماپون 50 سيلز لاءِ ڏيکاريل آھن.شمارياتي فرق شاگردن جي ٽي ٽيسٽ استعمال ڪندي ڳڻيا ويا.
(الف) PI3K-AKT رستي جي روڪٿام ۽ چالو ڪرڻ جي اسڪيمياتي نمائندگي AJ تبديلين ۽ بچاء جي نتيجي ۾، ترتيب سان.(ب) تجويز ڪيل ماڊل AKT پروٽين جي استحڪام لاءِ SPECC1L پاران.
پريميگريٽري سي اين سي سيز کي AJ lysis جي ضرورت هوندي آهي ته جيئن انٽريئر نيورل فولڊ نيوروپيٿيليل سيلز 1,15,32 کان الڳ ٿي وڃن.AJ اجزاء جي وڌندڙ داغ ۽ SPECC1L-Deficient Cells ۾ apical-basal AJ جي نقصان جو نقصان ٻنهي ويٽرو ۽ vivo ۾، SPECC1L جي جسماني قربت سان β-catein تائين، تجويز ڪيو ته SPECC1L ڪمن کي صحيح طور تي برقرار رکڻ لاءِ AJ مقامي استحڪام لاءِ. تنظيمي عضون.actin cytoskeleton.SPECC1L جو تعلق Actin cytoskeleton ۽ β-catenin سان ۽ SPECC1L جي غير موجودگيءَ ۾ ڪنڊينسڊ ايڪٽين فيلامينٽس جي تعداد ۾ اضافو AJ کثافت ۾ مشاهدو ڪيل واڌ سان مطابقت رکي ٿو.هڪ ٻيو امڪان اهو آهي ته SPECC1L جي گھٽتائي واري سيلز ۾ ايڪٽين فائبر جو وڌندڙ تعداد انٽرسيلولر ٽينشن ۾ تبديلي جي ڪري ٿي.ڇاڪاڻ ته سيلولر دٻاءُ AJ 33 جي متحرڪ کي متاثر ڪري ٿو، وولٹیج تبديلين جي نتيجي ۾ وڌيڪ ڦهليل AJ 34 ٿي سگهي ٿي.تنهن ڪري ڪا به تبديلي سي اين سي سي جي تہن کي متاثر ڪندي.
Wnt1 ابتدائي اعصابي فولڊ ۾ ظاهر ڪيو ويو آهي جيڪي اعصابي ڪرسٽ سيلز کي جنم ڏين ٿا.اهڙيء طرح، Wnt1-cre نسب جي نشاندهي ٻنهي کان اڳ ۽ لڏپلاڻ واري NCC35 جي نشاندهي ڪري ٿي.بهرحال، Wnt1 پڻ ڊورسل دماغ جي ٽشو ڪلون کي نشانو بڻائيندو آهي جيڪي ابتدائي نيورل فولڊ 35,36 مان نڪتل آهن، اهو ممڪن آهي ته اسان جي E9.5 ميوٽنٽ جو داغ Wnt1 مارڪرز لاء کليل نيورل فولڊ ۾ CNCC نه آهي.اين سي سي مارڪرز AP2A ۽ SOX10 لاءِ اسان جي مثبت داغ جي تصديق ڪئي وئي آهي ته اسپيڪ 11 ميوٽيٽ ايمبريوز جا بي نقاب ٿيل نيورل فولڊ حقيقت ۾ CNCC تي مشتمل هئا.ان کان علاوه، جيئن ته AP2A ۽ SOX10 شروعاتي لڏپلاڻ ڪندڙ NCC جا نشان آهن، مثبت داغ ظاهر ڪن ٿا ته اهي سيلز پوسٽ لڏپلاڻ وارا CNCC آهن جن کي E9.5 ذريعي ترتيب نه ٿو ڏئي سگهجي.
اسان جي ڊيٽا جو مشورو ڏنو ويو آهي ته AJ جي ماليڪيولر ريگيوليشن SPECC1L پاران PI3K-AKT سگنلنگ ذريعي وچولي ڪئي وئي آهي.AKT سگنلنگ SPECC1L جي گھٽتائي واري سيلز ۽ بافتن ۾ گھٽجي وئي آھي.Fantauzzo et al.PI3K-AKT سگنلنگ لاء سڌو ڪردار جي حمايت ڪريو craniofacial morphogenesis ۾.(2014) ڏيکاريو ويو آهي ته PDGFRα-based PI3K-AKT سگنلنگ جي چالو ڪرڻ جي گھٽتائي کي ڇڪيل تالو فينوٽائپ جي ڪري ٿي.اسان اهو پڻ ڏيکاريون ٿا ته PI3K-AKT رستي جي نمائش AJ ۽ U2OS سيلز ۾ سيل جي شڪل کي تبديل ڪرڻ لاء ڪافي آهي.اسان جي نتيجن سان مطابقت، Cain et al.37 ڏيکاريو ويو آهي ته PI3K α110 subunit جي گهٽتائي endothelial سيلز ۾ نتيجو آهي ساڳئي واڌ ۾ pericellular β-catein staining، جنهن جو حوالو ڏنو ويو آهي "connectivity index" ۾ اضافو.تنهن هوندي به، endothelial خاني ۾ جن جي actin filaments اڳ ۾ ئي انتهائي منظم آهن، PI3K-AKT رستي جي دٻاء جي نتيجي ۾ هڪ خالي سيل جي شڪل ۾.ان جي ابتڙ، SPECC1L-kd U2OS سيلز هڪ ڊگهي سيل جي شڪل ڏيکاري ٿي.اهو فرق سيل جي قسم جي مخصوص ٿي سگهي ٿو.جڏهن ته PI3K-AKT سگنلنگ جو دٻائڻ مستقل طور تي ايڪٽين سائٽوسڪليٽن کي متاثر ڪري ٿو، سيل جي شڪل تي اثر مرڪزي ايڪٽين فائبر جي کثافت ۽ تنظيم ۾ تبديلين جي سبب تڪرار ۾ تبديلين جي ذريعي طئي ڪيو ويندو آهي.U2OS سيلز ۾، اسان استعمال ڪيو صرف سيل جي شڪل تبديلين جي مارڪر جي طور تي SPECC1L-deficient AJ تبديلي ۽ بحالي.آخر ۾، اسان اهو سمجهون ٿا ته SPECC1L جي گھٽتائي ۾ AKT رستي جي نمائش AJ جي استحڪام کي وڌائي ٿي ۽ سي اين سي سي ۾ ڊيليشن کي گھٽائي ٿي.
دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، پين-AKT سطحون گهٽجي ويون ويٽرو ۽ وييو ۾ فاسفوريليٽ 473-AKT سطحن جي اضافي ۾ SPECC1L جي غير موجودگيءَ ۾، AKT پروٽين جي استحڪام يا ٽرن اوور جي سطح تي PI3K-AKT سگنلنگ جي ضابطي جي تجويز ڏني وئي.SPECC1L ۽ MID1 جينز، ٻئي Opitz/GBBB سنڊروم سان جڙيل آهن، پروٽين کي انڪوڊ ڪن ٿا جيڪي مائڪروٽيوبولس 18,22 کي مستحڪم ڪن ٿا.ميکانيزم جنهن جي ذريعي SPECC1L ۽ MID1 وچولي مائڪروٽيوبول جي استحڪام کي مڪمل طور تي سمجهي نه سگهيو آهي.SPECC1L جي صورت ۾، هن استحڪام ۾ مائڪروٽيوبولس 18 جي ​​ذيلي سيٽ جي وڌايل ايڪٽيليشن شامل آهي.اهو ممڪن آهي ته SPECC1L ٻين پروٽينن جهڙوڪ AKT کي مستحڪم ڪرڻ لاءِ ساڳيو ميکانيزم استعمال ڪري.اهو ڏيکاريو ويو آهي ته AKT پروٽين ۾ lysine residues جي acetylation جھلي لوڪلائيزيشن ۽ phosphorylation 38 ۾ گهٽتائي جي ڪري ٿي.ان کان علاوه، AKT تي ساڳئي ليسين جي باقيات تي K63 زنجير جي استعمال کي ان جي جھلي لوڪلائيزيشن ۽ چالو ڪرڻ جي ضرورت آهي 39,40.SPECC1L پروٽينن سان تعلق رکندڙ ڪيترن ئي عنصرن جي وچ ۾ سڃاڻپ ڪئي وئي مختلف اعلي throughput خمير ٻن-هائبرڊ اسڪرين ۾، چار - CCDC841، ECM2942، APC ۽ UBE2I43 - پروٽين جي بدلي ۾ يا استحڪام ۾ شامل ڪيو ويو آهي ubiquitination يا sumoylation ذريعي.SPECC1L شايد AKT ليسين جي باقيات جي ترجمي واري تبديلي ۾ شامل ٿي سگھي ٿو، AKT جي استحڪام کي متاثر ڪري ٿو.بهرحال، AKT پروٽين جي مقامي ڪرڻ ۽ استحڪام ۾ SPECC1L جي نازڪ ڪردار کي واضح ڪيو وڃي ٿو.
Vivo ۾ SPECC1L اظهار ۾ سخت خرابين جي نتيجي ۾ AJ مارڪر جي داغ ۽ خراب CNCC اوورلي ۾ اضافو ٿيو، انهي سان گڏ وڌندڙ اپوپوٽوسس ۽ ابتدائي جنين جي موت.اڳيون رپورٽون ظاهر ڪيون ويون آهن ته ماؤس ميوٽنٽ اپوپٽوسس جي وڌندڙ سطحن سان لاڳاپيل آهن نيورل ٽيوب جي خرابين 44,45,46,47 ۽ craniofacial خرابين 48 سان.اهو تجويز ڪيو ويو آهي ته عصبي فولڊ يا فارينجيل آرچز ۾ زيادتي سيل جي موت جو نتيجو ٿي سگهي ٿو ته مناسب morphogenetic تحريڪ 48,49,50 لاء گهربل سيلن جي ناکافي تعداد.ان جي ابتڙ، اسان جي SPECC1L جي گھٽتائي واري سيل لائنن کي اعتدال سان گھٽجي ويو SPECC1L اظهار ڏيکاريو صرف AJ تبديليون بغير سيل جي موت جي ثبوت کان سواء.بهرحال، انهن ڪي ڊي سيلز ۾ PI3K-AKT رستي جي ڪيميائي نمائش جي نتيجي ۾ اپوپوٽوسس وڌايو ويو.اهڙيء طرح، SPECC1L اظهار يا فنڪشن ۾ وچولي گهٽتائي سيل جي بقا کي يقيني بڻائي ٿي.اهو مشاهدو سان مطابقت رکي ٿو ته نادر اسپيڪ 11 ميوٽنٽ جنين جيڪي اسٽيج تي گرفتاري کان بچي ويندا آهن.E9.5-شايد جين جي قبضي جي ڪارڪردگيءَ ۾ گھٽتائي جي ڪري- پنھنجي نيورل ٽيوب کي بند ڪرڻ جي قابل ٿي وڃن ٿا ۽ بعد ۾ ترقيءَ ۾ بند ٿي وڃن ٿا، اڪثر ڪريانيوفيسيئل خرابين سان (تصوير S3).انهي سان گڏ هڪجهڙائي سان گڏ هيٽروزائگس اسپيڪ1 ايل ايمبريوز جو نادر واقعو craniofacial غير معموليات سان آهي - شايد جين جي قبضي جي ڪارڪردگي ۾ واڌ جي ڪري - انهي سان گڏ زيبرا فش ۾ ڳولڻ جنهن ۾ ٻن SPECC1L orthologues (specc1lb) جو سبب بڻجندو آهي، جن ۾ laterotphenype جي نقصان جو سبب آهي. هيٺيون جبل ۽ ٻه طرفي clefts51.اهڙيء طرح، انساني مريضن ۾ سڃاڻپ ٿيل heterozygous SPECC1L نقصان جي فنڪشن ميوٽيشنز ڪري سگھي ٿو SPECC1L فنڪشن ۾ ننڍين خرابين جو سبب Craniofacial morphogenesis، انهن جي orofacial clefts جي وضاحت ڪرڻ لاء ڪافي آهي.SPECC1L-بنياد تي ضابطي جي وچ ۾ رابطي جي ضابطي شايد palatogenesis ۽ pharyngeal arches جي فيوزن ۾ ڪردار ادا ڪري سگھي ٿي.SPECC1L فنڪشن جي وڌيڪ مطالعي ۾ مدد ڪندي سي اين سي سي ۾ عارضي انٽيليولر رابطن جي ڪردار کي واضح ڪرڻ ۾ مدد ڪندو نيورل ٽيوب بندش دوران نيوروپيٿيليل سيل موٽيلٽي ۽ ڪرنيوفائيل مورفوگينيسس ۾.
U2OS osteosarcoma ڪنٽرول ۽ SPECC1L-kd سيلز اڳ ۾ بيان ڪيو ويو آهي (سعدي ايٽ ال.، 2011).SPECC1L جي خلاف اينٽي باڊيز پڻ اڳ ۾ ئي منسوب ڪيا ويا آهن (سعدي ايٽ ال.، 2011).اينٽي β-ڪيٽينن اينٽي باڊيز (خرگوش؛ 1:1000؛ سانتا کروز، ڊالس، TX) (ماؤس؛ 1:1000؛ سيل سگنلنگ ٽيڪنالاجي، ڊنورس، ايم اي)، ميوسين IIb (1:1000؛ سگما-الڊرچ، سينٽ لوئس) ) , MO) ), E-cadherin (1:1000; Abkam, Cambridge, MA), AP2A (1:1000; Novus Biologicals, Littleton, Colo.), SOX10 (1:1000; 1000; Aviva Systems Biology, San Diego , ڪيليفورنيا), DLX2 (1:1000; Abcam, Cambridge, MA), phospho-Ser473-AKT (1:1000; سيل سگنلنگ ٽيڪنالاجي, Danvers, MA), pan-AKT (1:1000; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA )، KI67 (1:1000؛ سيل سگنلنگ ٽيڪنالاجي، ڊنورس، ايم اي)، ڪليوڊ ڪئسپيس 3 (1:1000؛ سيل سگنلنگ ٽيڪنالاجي، ڊنورس، ايم اي) ۽ β-ايڪٽين (1:2500؛ سگما-الڊرچ، سينٽ لوئس، MO) استعمال ڪيو ويو جيئن بيان ڪيو ويو..Actin filaments Acti-stain rhodamine phalloidin (Cytoskeleton, Denver, Colorado) سان داغ ٿيل هئا.
U2OS ڪنٽرول سيلز ۽ SPECC1L-kd سيلز معياري اعلي گلوڪوز DMEM ۾ 10٪ fetal bovine serum (لائف ٽيڪنالاجيز، ڪارلسباد، CA) سان گڏ ڪيا ويا.AJ تبديلين لاءِ، 2 x 105 سيلن کي شيشي تي ٻج ڪيو ويو 0.1٪ پورسين جليٽين (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) سان علاج ڪيو ويو ۽ سيل جي شڪل ۾ تبديلين لاءِ مشاهدو ڪيو ويو.سيلز مختلف وقت جي پوائنٽن تي گڏ ڪيا ويا: ٻج پوکڻ کان 4 ڪلاڪ (t = 1)، ٻج پوکڻ کان 24 ڪلاڪ (t = 2)، سيل جي شڪل ۾ تبديلي کان سواء سنگم (t = 3)، سيل جي شڪل ۾ تبديلي (t = 4) , 24 h کان پوء سيل جي شڪل جي تبديلي (t = 5) ۽ 48 h کان پوء سيل جي شڪل جي تبديلي کان پوء (t = 6) (تصوير 1، 2، 3).PI3K-AKT رستي کي ماڊل ڪرڻ لاءِ، سيلز PI3K-AKT انابيٽر وورٽمنين (TOCRIS Biosciences، Minneapolis، Minnesota) يا SC-79 ايڪٽيوٽر (TOCRIS Biosciences، Minneapolis Adams، Minnesota Adams) سان ظاهر ڪيل ڪنسنٽريشن تي ڪلچر ڪيا ويا.وچولي تي مشتمل ڪيميائي روزانو تبديل ڪيو ويو.
فريم بائي فريم رڪارڊنگ لائيو ڪنٽرول ۽ KD سيلز تي عام ڪلچر جي حالتن هيٺ ڪيون ويون، ۽ مرحلي جي برعڪس تصويرون 7 ڏينهن لاءِ هر 10 منٽن ۾ گڏ ڪيون ويون.تصويرون هڪ ڪمپيوٽر-ڪنٽرول ٿيل Leica DM IRB inverted microscope استعمال ڪندي حاصل ڪيون ويون آهن هڪ ميڪيڪل اسٽيج سان ليس ۽ هڪ 10 × N-PLAN مقصد هڪ QImaging Retiga-SRV ڪئميرا سان ڳنڍيل آهي.تصويرن جي دوران، سيل ڪلچر کي 37 ° C تي 5٪ CO2 سان گڏ خشڪ ماحول ۾ برقرار رکيو ويو.
ريجنل ميوٽنٽ ماؤس ريسورس سينٽر (UC Davis، CA) مان ٻه جين ٽريپ ES سيل لائينون DTM096 ۽ RRH048 استعمال ڪيا ويا Specc11 deficient مائوس لائينون، Specc1lgtDTM096 ۽ Specc1lgtRRH046 ٺاهيا ويا.مختصر طور تي، 129 / REJ ES سيلز C57BL6 blastocysts ۾ انجيل ڪيا ويا.نتيجي ۾ نڪرندڙ چيميرڪ نر چوهڙن کي ماده C57BL6 چوڪن سان پاليو ويو ته جيئن اگوٽي ڪوٽ جي رنگت سان اولاد کي سڃاڻي سگهجي.جين ٽرپ ویکٹر انسرٽس جي موجودگي heterozygotes کي سڃاڻڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو.چوٿون 129/REJ؛ C57BL6 جي مخلوط پس منظر تي رکيا ويا.جينياتي ٽريپ ویکٹر جي داخل ٿيڻ واري سائيٽ جي جڳھ جي تصديق ڪئي وئي RT-PCR، جينوم جي ترتيب، ۽ جينياتي مڪمل ڪرڻ (ضمني شڪل 1).ڊبل heterozygous Specc1lGT چوٿين جي CNCC نسب کي ٽريڪ ڪرڻ لاء، ROSAmTmG (#007576) ۽ Wnt1-Cre (#003829) چوٿون (جيڪسن ليبارٽري، بار هاربر، ME) کي پار ڪيو ويو ته ROSAmTmG ۽ Wnt1-Creosl ۾ ايم پي اي سي سي سي ايل اي ايم پي اي سي سي ايل ايم پي اي سي جي پيداوار لاء.چوٿون ۾ سڀ تجربا ڪيا ويا پروٽوڪول جي مطابق منظور ڪيل ادارن جي جانورن جي سنڀال ۽ استعمال ڪميٽي آف ڪنساس ميڊيڪل سينٽر يونيورسٽي.
جنين کي مقرر ڪيو ويو (1% formaldehyde, 0.2% glutaraldehyde, 2 mM MgCl2, 0.02% NP-40, 5 mM EGTA) ڪمري جي حرارت تي 60 منٽ لاءِ.X-gal staining solution (5 mM potassium ferricyanide, 5 mM potassium ferrocyanide, 2 mM MgCl2, 0.01% sodium deoxycholate, 0.02% NP-40, 1 mg/ml X-gal) اسٽين ڊولپمينٽ 3 ° C تي ڪيو ويو. .1-6 ڪلاڪن اندر °C.جنين کي 4٪ PFA ۾ پوسٽ مقرر ڪيو ويو ۽ بصري ڪيو ويو.
مغربي بلوٽنگ لاء، سيلز کي غير فعال ليسس بفر (Promega، Fitchburg، WI) ۾ شامل ڪيو ويو HALT protease inhibitors (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) جي مرکب سان.Lysates 12٪ polyacrylamide Mini-PROTEAN TGX تيار ٿيل جيل تي عمل ڪيو ويو (Bio-Rad، Hercules، CA) ۽ Immobilon PVDF جھلي (EMD Millipur، Billerica، MA) ڏانهن منتقل ڪيو ويو.جھليون PBS ۾ 5٪ کير ۾ بند ڪيون ويون آھن جن ۾ 0.1٪ Tween آھن.اينٽي باڊيز رات جو 4 ° C تي يا ڪمري جي حرارت تي هڪ ڪلاڪ لاءِ پکڙيل هئا.Femto SuperSignal West ECL reagent (Thermo Scientific, Waltham, MA) استعمال ڪيو ويو سگنل نسل لاءِ.Immunostaining لاءِ، جنين کي رات جو 4٪ PFA/PBS ۾ مقرر ڪيو ويو ۽ cryopreserved.Tsue cryosections بلاڪ ڪيا ويا PBS ۾ 1% نارمل بکري سيرم (Thermo Scientific, Waltham, MA) ۽ 0.1% Triton X-100 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) ۽ پوءِ انڪيوبيٽر ۾ 4°C تي انڪيوبيٽ ڪيو ويو رات.اينٽي اينٽي باڊي ۽ فلورسنٽ سيڪنڊري اينٽي باڊي (1:1000) سان 1 ڪلاڪ لاءِ 4°C تي.داغ ٿيل حصا پرو لانگ گولڊ ميڊيم ۾ رکيا ويا (Thermo Scientific، Waltham MA) ۽ فليٽ تصويرون حاصل ڪيون ويون ليڪا TCS SPE confocal microscope استعمال ڪندي.هر اموناسٽيننگ کي ٽن آزاد تجربن جي طور تي ڪيو ويو cirossections تي گهٽ ۾ گهٽ ٻن mutant embryos جي.ھڪڙو نمائندو تجربو ڏيکاريو ويو آھي.
سيلز تبديل ٿيل RIPA بفر (20 ايم ايم ٽريس-ايڇ سي ايل، پي ايڇ 8.0، 1٪ NP-40، 130 ايم ايم اين سي ايل، 10٪ گليسرول، 2 ايم ايم اي ڊي ٽي اي، ۽ HALT پروٽيز انبيٽر (Sigma-Aldrich، MOUI) ۾ پکڙيل هئا. مختصر طور تي، ليسيٽس کي پروٽين G مقناطيسي موتي (لائف ٽيڪنالاجي، ڪارلسباد، CA) سان اڳ ۾ صاف ڪيو ويو ۽ پوء رات جو 4 ° C تي انڪيوبيو ويو. اينٽي SPECC1L يا IgG پروٽين G پروٽين موتي سان SPECC1L ڪڍڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو ۽ مغربي بلٽنگ اينٽي استعمال ڪندي ڪئي وئي. -β-catenin antibody مٿي بيان ڪيو ويو آهي Co-IP تجربا ڏيکاريل آهن چار آزاد تجربن جا نمائندا.
فيڪس ڪلچرڊ سيلز يا مائوس جي جنين جي ٽشوز کي يونيورسٽي آف ڪنساس ميڊيڪل سينٽر ۾ اليڪٽران مائڪرو اسڪوپي سينٽر کي فراهم ڪيو ويو.مختصر طور تي، نمونا EMbed 812 resin (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA) ۾ شامل ڪيا ويا، رات جو 60 ° C تي پوليمرائز ڪيو ويو، ۽ 80 nm تي سيڪشن ڪيو ويو Leica UC7 ultramicrotome استعمال ڪندي هيرن جي بليڊ سان.حصن کي 100 kV Lab6 گن سان ليس JEOL JEM-1400 ٽرانسميشن اليڪٽران خوردبيني استعمال ڪندي ڏٺو ويو.
هن مضمون جو حوالو ڪيئن ڏيو: Wilson, NR et al.SPECC1L جي گھٽتائي جي ڪري ورهايل جوڑوں جي استحڪام کي وڌايو وڃي ٿو ۽ ڪنيئل نيورل ڪرسٽ سيلز جي ڊيليشن کي گھٽائي ٿو.سائنس.6، 17735؛doi: 10.1038/srep17735 (2016).
سينٽ جين، جي-پي.نيورل ڪرسٽ جي شموليت ۽ فرق.(اسپرنگر سائنس + بزنس ميڊيا؛ لينڊس بايو سائنس/Eurekah.com، 2006).
Cordero، DR et al.ڪرنيئل نيورل ڪرسٽ سيلز حرڪت ۾: انهن جو ڪردار ڪرنيوفائيل ڊولپمينٽ ۾.آمريڪي جرنل آف ميڊيڪل جينياتي.حصو A 155A، 270–279، doi:10.1002/ajmg.a.33702 (2011).
بولينڊ، آر پي نيوروڪرسٽوپيٿيا: ان جي ترقي ۽ ترقي 20 سالن کان مٿي.ٻارن جي بيمارين جو ماهر.pathology.ليبارٽريدوا.17، 1-25 (1997).
منگولڊ E.، Ludwig KU ۽ Noten MM Breakthrough in the genetics of orofacial clefts.ماليڪيولر دوائن ۾ رجحانات 17، 725-733، doi:10.1016/j.molmed.2011.07.007 (2011).
مينو، ايم ۽ رلي، ايف ايم ماليڪيولر ميکانيزم جو ڪرينيل نيورل ڪرسٽ سيل لڏپلاڻ ۽ نمونن جي ڪرينوفيسيل ڊولپمينٽ دوران.ڊولپمينٽ 137، 2605-2621، doi: 10.1242/dev.040048 (2010).
Dixon، MJ، Marazita، ML، Beaty، TH ۽ Murray، JK Cleft lip and palate: سمجھڻ جينياتي ۽ ماحولياتي اثرات.قدرتي تبصرو.جينياتي 12، 167-178، doi: 10.1038/nrg2933 (2011).
انگرام، سي آر وغيره.چمڙي جي غير معمولي مورفوگنيسيس، انگن، ۽ ڪرنيوفائيشيل علائقي ۾ interferon-regulating factor-6 (Irf6) جي گھٽتائي واري چوٿين ۾.نيشنل جينٽ.38، 1335-1340، doi: 10.1038/ng1903 (2006).
پيرارڊ-جنويد، ايم وغيره.GRHL3 ۾ غالب ميوٽيشنز وان ڊير وورڊ سنڊروم جو سبب بڻجن ٿا ۽ زباني پرديرم جي ترقي کي خراب ڪن ٿا.Am J Hum Genet 94, 23-32, doi: 10.1016/j.ajhg.2013.11.009 (2014).
هيرس، ايم جي ۽ جريلوف، ڊي ايم نيورل ٽيوب بندش ۾ خرابين سان گڏ ماؤس ميوٽنٽ جي لسٽ کي اپڊيٽ ڪيو ۽ نيورل ٽيوب بندش جي مڪمل جينياتي سمجھڻ جي طرف پيش رفت.پيدائش جي خرابين جي تحقيق.حصو A، ڪلينڪل ۽ ماليڪيولر ٽيراٽولوجي 88، 653-669، doi: 10.1002/bdra.20676 (2010).
Fantauzzo، KA ۽ Soriano، P. PI3K-ثالث PDGFRalpha سگنلنگ هڪ p53-انحصار انٽرا سيلولر رستي ذريعي کنڊ جي ترقي ۾ بقا ۽ واڌ کي منظم ڪري ٿو.جيني ڊولپمينٽ 28، 1005-1017، doi: 10.1101/gad.238709.114 (2014).
ڪوپ، AJ، گرين، ND ۽ Murdoch، JN Disheveled: Relation of Convergent expansion to neural tube closur.نيورولوجي ۾ رجحانات.26، 453–455، doi: 10.1016/S0166-2236(03)00212-1 (2003).